有實(shí)驗室的地方，就不可避免的會(huì )出現實(shí)驗室污染。實(shí)驗室的污染，不僅會(huì )影響實(shí)驗與科研的質(zhì)量和效果,還對實(shí)驗室工作人員的身體健康有損害，今天小編就和您一起了解下PCR實(shí)驗室的污染原因及解決方法。 

☆ PCR實(shí)驗室污染

標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時(shí)，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過(guò)程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。 

PCR試劑的污染：主要是由于在PCR試劑配制過(guò)程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

PCR擴增產(chǎn)物污染：這是PCR反應中最主要最常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠遠高于PCR檢測數個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可造成假陽(yáng)就可形成假陽(yáng)性。  

還有一種容易忽視，最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染；在空氣與液體面摩擦時(shí)就可形成氣溶膠，在操作時(shí)比較劇烈地搖動(dòng)反應管，開(kāi)蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。

實(shí)驗室中克隆質(zhì)粒的污染：在分子生物學(xué)實(shí)驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽(yáng)性對照的檢驗室，這個(gè)問(wèn)題也比較常見(jiàn)，因為克隆質(zhì)粒在單位容積內含量相當高，另外在純化過(guò)程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內的質(zhì)粒，由于活細胞的生長(cháng)繁殖的簡(jiǎn)便性及具有很強的生命力，其污染可能性也很大。    

☆ 污染監測  

一個(gè)好的實(shí)驗室，要時(shí)刻注意污染的監測，考慮有無(wú)污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。    

對照試驗  

1、陽(yáng)性對照：在建立PCR反應實(shí)驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽(yáng)性對照，它是PCR 反應是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標志。

2、陰性對照：每次PCR實(shí)驗務(wù)必做陰性對照。它包括①標本對照：被檢的標本是血清就用鑒定后的正常血清作對照；被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞作對照。②試劑對照：在PCR試劑中不加模板DNA或RNA，進(jìn)行PCR擴增，以監測試劑是否污染。   

3、重復性試驗   

4、選擇不同區域的引物進(jìn)行PCR擴增   

☆ 防止污染的方法  

進(jìn)行PCR操作時(shí)，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。   

劃分操作區：目前，普通PCR尚不能做到單人單管，實(shí)現完全閉管操作，但無(wú)論是否能夠達到單人單管，均要求實(shí)驗操作在三個(gè)不同的區域內進(jìn)行，PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區內進(jìn)行：

1. 試劑準備區。 

2．標本制備區。 

3. PCR擴增區及分析區。   

切記：任何一間的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個(gè)工作區。

分裝試劑：PCR擴增所需要的試劑均應在生物安全柜、裝有紫外燈的超凈工作臺或負壓工作臺配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中，不能用來(lái)吸取擴增后的DNA和其他來(lái)源的DNA：  

1．PCR用水應為高壓的雙蒸水；

2．引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無(wú)PCR擴增產(chǎn)物區配制；

3．引物和dNTP應分裝儲存，分裝時(shí)應標明時(shí)間，以備發(fā)生污染時(shí)查找原因。  

實(shí)驗操作注意事項   

盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽(yáng)性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進(jìn)行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節都應該注意：   

1. 戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套；   

2. 使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長(cháng)時(shí)間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；  

3. 避免反應液飛濺，打開(kāi)反應管時(shí)為避免此種情況，開(kāi)蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；   

4. 操作多份樣品時(shí)，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的精確度；   

5. 最后加入反應模板，加入后蓋緊反應管；   

6. 操作時(shí)設立陰陽(yáng)性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴增系統的可信性；   

7. 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器最容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染，最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒(méi)有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過(guò)程中加樣器應該專(zhuān)用，不能交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區；   

8. 重復實(shí)驗，驗證結果，慎下結論。